Ферменты и рекомбинантная ДНК

Рекомбинантная ДНК – искусственное сочетание фрагментов ДНК из разных источников. Впервые она была получена в 1972–73 годах в опытах П. Берга, С. Коэна и Г. Бойера. Этапы: 1) получение нужного гена из организма-донора – разрезанием рестриктазой, созданием кДНК на иРНК с помощью ревертазы или, если известна его последовательность нуклеотидов, химическим синтезом; 2) выбор вектора – обычно плазмиды (или вируса, или фага), несущей ген устойчивости к антибиотику; 3) разрезание гена и вектора одной и той же рестриктазой и соединение их лигазой – образуется рекомбинантная плазмида; 4) введение её в клетку-реципиент (E. coli, дрожжи) – трансформация; 5) отбор – если в среду добавить антибиотик, выживут только бактерии, поглотившие рекомбинантную плазмиду; 6) клонирование – такие клетки размножаются, копии чужеродного гена умножаются (клонирование гена), и ген производит белок (экспрессия). Так получают инсулин человека, гормон роста и интерферон. Изучается генная терапия – замена дефектного гена здоровым.